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NADP蘋果酸脫氫酶(NADP-MDH)試劑盒

簡要描述:MDH (EC 1.1.1.37)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中,線粒體中MDH是TCA循環(huán)的關鍵酶之一,催化蘋果酸形成草酰乙酸;相反,胞漿中MDH催化草酰乙酸形成蘋果酸。草酰乙酸是重要的中間產(chǎn)物, 連接多條重要的代謝途徑。NADP蘋果酸脫氫酶(NADP-MDH)試劑盒現(xiàn)貨供應。

  • 更新時間:2024-06-29
  • 廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
  • 生產(chǎn)地址:上海
  • 訪  問  量:1276

詳細介紹

品牌YLKBIOCAS詳見說明書
分子式詳見說明書純度詳見說明書
分子量詳見說明書貨號YLK-SH109
規(guī)格100管/96樣、50管/48樣供貨周期現(xiàn)貨
主要用途科研應用領域化工,生物產(chǎn)業(yè)
測定方法:微量法、紫外分光光度法

NADP蘋果酸脫氫酶(NADP-MDH)試劑盒說明書

                                微量法100/96

   正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定

測定意義:

MDH EC 1.1.1.37)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中,線粒體中MDHTCA循環(huán)的關鍵酶之一,催化蘋果酸形成草酰乙酸;相反,胞漿中MDH催化草酰乙酸形成蘋果酸。草酰乙酸是重要的中間產(chǎn)物, 連接多條重要的代謝途徑。因此,MDH在細胞多種生理活動中扮演著重要的角色,包括線粒體的能量代謝、 蘋果酸-天冬氨酸穿梭系統(tǒng)、活性氧代謝和抗病性等。根據(jù)不同的輔酶特異性,MDH分為NAD-依賴的MDHNADP-依賴的MDH, NADP-MDH主要存在于真核細胞中。

測定原理:

NADP-MDH催化NADPH還原草酰乙酸生成蘋果酸,導致340nm處光吸收下降。

需自備的儀器和用品:

紫外分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。

試劑的組成和配制:

試劑一、提取液100 mL×1瓶,在4保存;

試劑二、液體20 mL×1瓶,在4保存;

試劑三、粉劑×1瓶,-20保存;

樣本測定的準備:

1、細菌、細胞或組織樣品的制備:

細菌或培養(yǎng)細胞:先收集細菌或細胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細菌或細胞數(shù)量(104個):試劑一體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬細菌或細胞加入1mL試劑一),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復30次);8000g 4離心10min,取上清,置冰上待測。

組織:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一),進行冰浴勻漿。8000g 4離心10min,取上清,置冰上待測。

2、血清(漿)樣品:直接檢測。

測定步驟:

1、  分光光度計或酶標儀預熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至340nm,蒸餾水調(diào)零。

2、檢測工作液的配制:用時在試劑三中加入19mL試劑二和0.5mL蒸餾水,充分混勻待用;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復凍融;

3、測定前將檢測工作液在37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)水浴10min以上。

4、在微量石英比色皿或96孔板中加入5μL樣本和195μL工作液,混勻后立即記錄340nm20s時的吸光值A1 1min20s后的吸光值A2計算ΔA=A1-A2。

注意:A1-A2大于0.5,需將酶液用提取液稀釋,使A1-A2小于0.5,可提高檢測靈敏度。計算公式中乘

以相應稀釋倍數(shù)。

NADP-MDH活力單位的計算:

a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下

1、血清(漿)NADP-MDH活力的計算

單位的定義:每毫升血清(漿)每分鐘消耗1 nmolNADPH定義為一個酶活力單位。

NADP-MDHnmol/min/mL=[ΔA×V反總÷ε×d×109]÷V÷T=6430×ΔA

2、組織、細菌或細胞中NADP-MDH活力的計算:

1)按樣本蛋白濃度計算:

單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘消耗1 nmolNADPH定義為一個酶活力單位。

NADP-MDHnmol/min/mg prot=[ΔA×V反總÷ε×d×109]÷(V×Cpr) ÷T=6430×ΔA÷Cpr

2)按樣本鮮重計算:

單位的定義:每g組織每分鐘消耗1 nmolNADPH定義為一個酶活力單位。

NADP-MDHnmol/min/g 鮮重=[ΔA×V反總÷ε×d×109W ×V÷V樣總)÷T =6430×ΔA÷W

3)按細菌或細胞密度計算:

單位的定義:每1萬個細菌或細胞每分鐘消耗1 nmolNADPH定義為一個酶活力單位。

NADP-MDHnmol/min/104 cell=[ΔA×V反總÷ε×d×109V÷V樣總×500÷T=12.86×ΔA

V反總:反應體系總體積,2×10-4 L;εNADPH摩爾消光系數(shù),6.22×103 L / mol /cmd:比色皿光徑,1cm;V樣:加入樣本體積,0.005 mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應時間,1 min;W:樣本質(zhì)量,g;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL500:細胞或細菌總數(shù),500萬。

b. 96孔板測定的計算公式如下

1、血清(漿)NADP-MDH活力的計算

單位的定義:每毫升血清(漿)每分鐘消耗1 nmolNADPH定義為一個酶活力單位。

NADP-MDHnmol/min/mL=[ΔA×V反總÷ε×d×109]÷V÷T=12860×ΔA

2、組織、細菌或細胞中NADP-MDH活力的計算:

1)按樣本蛋白濃度計算:

單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘消耗1 nmolNADPH定義為一個酶活力單位。

NADP-MDHnmol/min/mg prot=[ΔA×V反總÷ε×d×109]÷(V×Cpr) ÷T=12860×ΔA÷Cpr

2)按樣本鮮重計算:

單位的定義:每g組織每分鐘消耗1 nmolNADPH定義為一個酶活力單位。

NADP-MDHnmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V反總÷ε×d×109W× V÷V樣總)÷T =12860×ΔA÷W

3)按細菌或細胞密度計算:

單位的定義:每1萬個細菌或細胞每分鐘消耗1 nmolNADPH定義為一個酶活力單位。

NADP-MDHnmol/min/104 cell=[ΔA×V反總÷ε×d×109500×V÷V樣總)÷T=25.72×ΔA

V反總:反應體系總體積,2×10-4 LεNADPH摩爾消光系數(shù),6.22×103 L / mol /cmd96孔板光徑,0.5cmV樣:加入樣本體積,0.005 mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應時間,1 min;W:樣本質(zhì)量,g;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;500:細胞或細菌總數(shù),500萬。

NADP蘋果酸脫氫酶(NADP-MDH)試劑盒僅供科研!


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