果糖-1,6-二磷酸（Fructose-1,6 Diphosphate，FDP）試劑盒說(shuō)明書

                                                    微量法100T/96S

注    意：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

測(cè)定意義：

果糖1,6-二磷酸是機(jī)體內(nèi)的高能代謝物和代謝調(diào)控劑，是糖酵解途徑的重要中間體，廣泛存在于動(dòng)植物和微生物體內(nèi)，能影響細(xì)胞內(nèi)鉀離子的濃度，改善葡萄糖和其他能量底物的代謝，促進(jìn)組織氧的釋放，廣泛應(yīng)用于臨床醫(yī)藥制劑。

測(cè)定原理：

醛縮酶催化果糖1,6-二磷酸降解，產(chǎn)物與DNPH縮合成紫紅色物質(zhì)，在540nm有特征吸收峰。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器：

天平、低溫離心機(jī)、研缽、恒溫水浴鍋、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板。

試劑組成和配制：

試劑一：液體110mL×1瓶，4℃保存。

試劑二：液體0.4mL×1支，4℃避光保存。

試劑三：液體4mL×1瓶，4℃避光保存。

試劑四：液體16mL×1瓶，4℃保存。

樣品處理：

1.        組織：按照質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g，加入1mL試劑一）加入試劑一，冰浴勻漿后于4℃，10000g離心10min，取上清待測(cè)。

2.        細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（10⁴個(gè)）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1mL試劑一），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；然后4℃，10000g離心10min，取上清待測(cè)。

3.        液體：直接檢測(cè)。

測(cè)定操作：

計(jì)算公式：

a.        用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y= 0.6971x+0.0012，R²=0.9983

1．按照質(zhì)量計(jì)算

FDP（mg/g 鮮重）= (△A-0.0012) ÷0.6971÷（W÷V樣總）

= 1.43×(△A-0.0012)÷W

2．按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

FDP（mg/10⁴ cell）= (△A-0.0012) ÷0.6971÷（細(xì)胞數(shù)量÷V樣總）

=1.43×(△A-0.0012)÷細(xì)胞數(shù)量

3．按照液體體積計(jì)算

FDP（mg/mL）= (△A-0.0012) ÷0.6971

= 1.43×(△A-0.0012)

W：樣本質(zhì)量，g；V樣總：加入提取液體積，1mL

b.       用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y= 0.3486x+0.0012，R²=0.9983

1．按照質(zhì)量計(jì)算

FDP（mg/g 鮮重）= (△A-0.0012) ÷0.3486÷（W÷V樣總）

= 2.87×(△A-0.0012)÷W

2．按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

FDP（mg/10⁴ cell）= (△A-0.0012) ÷0.3486÷（細(xì)胞數(shù)量÷V樣總）

= 2.87×(△A-0.0012)÷細(xì)胞數(shù)量

3．按照液體體積計(jì)算

FDP（mg/mL）= (△A-0.0012) ÷0.3486

= 2.87×(△A-0.0012)

W：樣本質(zhì)量，g；V樣總：加入提取液體積，1mL

注意事項(xiàng)：

Z低檢出限為1.72 mg/L。