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土壤脲酶(Solid-Urease,S-UE)測定試劑盒說明書

發(fā)布時(shí)間:2023/9/26      點(diǎn)擊次數(shù):452

土壤脲酶(Solid-Urease,S-UE)測定試劑盒說明書

                                         微量法100/48

 

   意 :正式測定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定

測定意義:

S-UE能夠水解尿素,產(chǎn)生氨和碳酸。土壤脲酶活性與土壤的微生物數(shù)量、有機(jī)物質(zhì)含量、全氮和速效氮含量呈正相關(guān)。土壤脲酶活性反應(yīng)了土壤的氮素狀況。

 

測定原理:

利用靛酚藍(lán)比色法測定脲酶水解尿素產(chǎn)生的NH3-N。

需自備的儀器和用品:

可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、甲苯(不允許快遞)和蒸餾水。

 

試劑的組成和配制:

試劑一:甲苯2mL×1瓶,4保存;(自備)

試劑二:粉劑×1瓶,臨用前加入9mL蒸餾水,充分溶解待用,4保存;用不完的試劑4保存;

試劑三:液體22mL×1瓶,4保存;

試劑四A液:液體×1支,4保存;試劑四B液:液體×1瓶,4保存;臨用前將A液倒入B液中混合,待用;用不完的試劑4保存一周;

試劑五:液體2mL×1瓶,4保存;

 

樣品處理:

新鮮土樣自然風(fēng)干或37度烘箱風(fēng)干,過30~50目篩。

 

測定步驟:

1 、培養(yǎng)


測定管

對(duì)照管

風(fēng)干土樣(g)

0.05

0.05

試劑一(μL

20

20

振蕩混勻,室溫放置15min

試劑二(μL

90


蒸餾水(μL


90

試劑三(μL

190

190

混勻,放入37水浴培養(yǎng)24h后,10000g 25離心10min,取上清液。

2、將培養(yǎng)結(jié)束的上清液稀釋10倍(取0.1mL上清液,加入0.9mL蒸餾水)。

3、測氨量(在微量石英比色皿或96孔板中加入下列試劑)


測定管

對(duì)照管

稀釋后的上清液(μL

80

80

試劑四(μL

15

15

試劑五(μL

15

15

充分混勻,室溫放置20min

蒸餾水(μL

90

90

混勻,于578nm處,蒸餾水調(diào)零,讀吸光值A,計(jì)算ΔA=A測定管-A對(duì)照管。每個(gè)測定管設(shè)一個(gè)對(duì)照管。

 

脲酶活力計(jì)算

a.用微量石英比色皿測定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸方程為y = 0.0915x +0.0373x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(μg/mL),y吸光值A

單位的定義:每天g土樣中產(chǎn)生1μg NH3-N定義為一個(gè)酶活力單位。

酶活力(μg/d/g 土樣)=(ΔA-0.0373) ÷0.0915×10×V反總÷W÷T =656×(ΔA -0.0373)

10:稀釋倍數(shù);T:反應(yīng)時(shí)間,1d V反總:反應(yīng)體系總體積:0.3mL;W:樣本質(zhì)量,0.05g。

 

b.96孔板測定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸方程為y = 0.04575x +0.0373;x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(μg/mL),y吸光值A。

單位的定義:每天g土樣中產(chǎn)生1μg NH3-N定義為一個(gè)酶活力單位。

酶活力(μg/d /g 土樣)=(ΔA-0.0373) ÷0.04575×10×V反總÷W÷T =1312×(ΔA -0.0373)

10:稀釋倍數(shù);T:反應(yīng)時(shí)間,1d; V反總:反應(yīng)體系總體積:0.3mL;W:樣本質(zhì)量,0.05g。


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