土壤錳過氧化物酶（Soil manganese peroxidase，S-Mnp）試劑盒說明書

       微量法100T/48S

注   意 ：正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。

測定意義：

錳過氧化物酶（EC1.11.1.13）是一種含亞鐵血紅素的過氧化物酶，主要存在于擔(dān)子菌中，屬于木質(zhì)素降解酶系，能有效的降解木質(zhì)素及廢水和土壤中比較難降解的氯化物，疊氮化合物、DTT，多環(huán)芳烴等。

測定原理：

錳過氧化物酶在Mn²⁺存在的條件下，將愈創(chuàng)木酚氧化為四鄰甲氧基連酚，在465nm有特征吸收峰。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器：

天平、低溫離心機(jī)、可見分光光度計/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、震蕩儀、甲苯。

試劑組成和配制：              

試劑一：液體12mL×1瓶，4℃保存。

試劑二：液體2mL×1支，4℃保存。

試劑三：液體4mL×1瓶，4℃避光保存。

試劑四：液體2mL×1支，4℃保存。                        

樣品處理：

新鮮土樣風(fēng)干，過30-50目篩。

測定操作：

酶活計算公式：

a.        用微量石英比色皿測定的計算公式如下

酶活性定義：每克土壤每天氧化1nmol愈創(chuàng)木酚所需的酶量為一個酶活力單位。

S-MnP活性（nmol/d /g 土樣）= ×V反總÷W÷T= 66.4×△A÷W

ε：愈創(chuàng)木酚摩爾消光系數(shù)：12100L/mol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V反總：反應(yīng)總體積，0.2mL；W：樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時間，3h

b.       用96孔板測定的計算公式如下

酶活性定義：每克土壤每天氧化1nmol愈創(chuàng)木酚所需的酶量為一個酶活力單位。

S-MnP活性（nmol/d /g土樣）= ×V反總÷W÷T= 132.8×△A÷W

ε：愈創(chuàng)木酚摩爾消光系數(shù)：12100L/mol/cm；d：比色皿光徑，0.5cm；V反總：反應(yīng)總體積，0.2mL；W：樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時間，3h