植物硝態(tài)氮試劑盒說明書

                                      微量法100T/96S

注    意：正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。

測定意義：

硝態(tài)氮是植物最主要的氮源。植物體內硝態(tài)氮含量反映了土壤中硝態(tài)氮的供應情況，可作為土壤氮肥的指標。測定植物體內的硝態(tài)氮含量，不僅能夠反映出植物的氮素營養(yǎng)情況，而且對鑒定蔬菜和以植物為原料的加工制品的品質也有重要的意義。

測定原理：

在濃酸條件下，NO^3-與水楊酸反應，生成硝基水楊酸，硝基水楊酸在堿性條件下（PH>12）呈黃色，在一定范圍內，其顏色深淺與含量成正比，可比色測定計算得硝態(tài)氮含量。

自備實驗用品及儀器：

蒸餾水、天平、常溫離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋。  

試劑組成和配制：

試劑一：粉劑×2支，4℃避光保存。臨用前根據(jù)用量每瓶加1.2mL濃硫酸充分溶解。

試劑二：液體60mL×1瓶，4℃保存。

試劑三：粉劑×1支，4℃保存。

樣本處理：

按照質量（g）：蒸餾水體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g，加入1mL蒸餾水）加入蒸餾水，室溫勻漿后置于90℃恒溫水浴鍋中浸提30min，期間不斷晃動或者置于90℃恒溫搖床中振蕩提取30min，待冷卻后于25℃，12000g離心15min，取上清待測。（深色植物勻漿后加入約3mg試劑三后再提取）

測定操作表：
分光光度計/酶標儀預熱30min，調節(jié)波長至410nm，蒸餾水調零。

1、   在EP管中如下表加樣

注意：空白管只需測定一次。

計算公式：

a.    用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標準曲線：y=0.0156x+0.0073，R²=0.9997

NO₃^—— N含量（mg/kg鮮重）=（△A-0.0073）÷ 0.0156÷（W÷V樣總）

               =64.1×（△A-0.0073）÷W

V樣總：加入提取液體積，1mL，W：樣本質量，g

a.        用96孔板測定的計算公式如下

標準曲線：y=0.0078x+0.0073，R²=0.9997

NO₃^—— N（mg/kg鮮重）=（△A-0.0073）÷ 0.0078÷（W÷V樣總）

               =128.2×（△A-0.0073）÷W

V樣總：加入提取液體積，1mL，W：樣本質量，g

注意事項：

1.        試劑一配制好后盡快使用，4℃可保存一周。

2.        試劑一和試劑二均具有強腐蝕性，操作時需做好防護措施。

3.        Z低檢出限為2μg/g。