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使用水通道蛋白ELISA試劑盒的詳細流程

更新時間:2023-10-19      點擊次數(shù):768
  水通道蛋白ELISA試劑盒是一種特異性檢測試劑盒,用于定量檢測組織或細胞中水通道蛋白的表達水平。該試劑盒采用間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)的方法,特異性檢測水通道蛋白的抗原抗體反應(yīng)。在ELISA試劑盒中,抗原先與特異性抗體結(jié)合,隨后加入酶標(biāo)記的二抗與抗體結(jié)合,最后加入底物顯色,顏色的深淺與待測樣本中水通道蛋白的含量呈正相關(guān)。
  水通道蛋白ELISA試劑盒的使用流程:
  樣品準(zhǔn)備:組織或細胞樣品需用冰冷的生理鹽水或PBS洗滌三次,再用勻漿器將組織破碎或用胰蛋白酶消化細胞,制備成細胞上清液或組織勻漿液。
  加樣:將樣品加入ELISA板中,每孔加入100μL。同時設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和空白孔。
  孵育:將ELISA板置于37℃孵育一定時間,讓樣品與抗原充分結(jié)合。
  洗滌:用洗滌液將未結(jié)合的物質(zhì)洗去,保證ELISA板中僅存在特異性結(jié)合的抗體和抗原。
  加酶標(biāo)二抗:向ELISA板中加入酶標(biāo)記的二抗,每孔加入100μL。
  孵育:將ELISA板再次置于37℃孵育一定時間,讓酶標(biāo)記的二抗與抗體充分結(jié)合。
  洗滌:用洗滌液將未結(jié)合的物質(zhì)洗去。
  加底物:向ELISA板中加入底物溶液,每孔加入100μL。
  測定:用酶標(biāo)儀測定ELISA板中各孔的光密度值,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品曲線計算待測樣本中水通道蛋白的含量。
  水通道蛋白ELISA試劑盒使用要求如下:
  試劑盒應(yīng)從冰箱取出后在室溫下平衡一段時間后再使用。
  加樣時應(yīng)準(zhǔn)確、迅速,避免樣品外溢或產(chǎn)生氣泡。
  孵育時應(yīng)注意溫度和時間,以保證抗原抗體充分結(jié)合。
  洗滌時應(yīng)保證每孔充分洗滌,避免殘留物影響檢測結(jié)果。
  加底物時應(yīng)避免氣泡產(chǎn)生,影響光吸收值。
  試劑盒中各組分不得交叉污染,否則會導(dǎo)致檢測結(jié)果異常。
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