淺述γ干擾素ELISA檢測試劑盒使用的基本原理

更新時間：2022-11-02 點擊次數：1053

　　γ干擾素ELISA檢測試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法，檢測釋放至血漿中的γ-干擾素，根據γ-干擾素水平判斷被檢牛是否感染過牛分枝桿菌。檢測準確：預先包被的抗體是IFNγ單克隆抗體。檢測相抗體也是IFNγ單克隆抗體，并經生物素標記。樣品和生物素標記抗體先后加入酶標板孔反應后，PBS或TBS洗滌。隨后加入過氧化物酶標記的親和素反應；經過PBS或TBS的洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人IFNγ呈正相關。

　　γ干擾素ELISA檢測試劑盒使用的基本原理有：

　　1. 抗原或抗體能以物理性地吸附于固相載體表面，或是蛋白和聚苯乙烯表面間的疏水性部分相互吸附，并保持其免疫學活性；

　　2. 抗原或抗體可通過共價鍵與酶連接形成酶結合物，而此種酶結合物仍能保持其免疫學和酶學活性；

　　3. 酶結合物與相應抗原或抗體結合后，可根據加入底物的顏色反應來判定是否有免疫反應的存在，而且顏色反應的深淺是與標本中相應抗原或抗體的量成正比例的，因此，可以按底物顯色的程度顯示試驗結果。

　　γ干擾素ELISA檢測試劑盒的使用注意事項有哪些？

　　實驗開始前，各試劑均應平衡至室溫；試劑或樣品稀釋時，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。實驗前應預測樣品含量，如樣品濃度過高時，應對樣品進行稀釋，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍，計算時再乘以相應的稀釋倍數。

　　封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。底物請避光保存。

　　試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡十五到三十分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。