一文看懂酶聯(lián)免疫分析試劑盒的基本原理及操作流程
更新時(shí)間：2022-06-16 點(diǎn)擊次數(shù)：989
酶聯(lián)免疫分析試劑盒基本原理是利用抗原抗體反應(yīng)的特異性，通過(guò)將待測(cè)物與酶連接，然后酶與底物產(chǎn)生顏色反應(yīng)，其所生成的顏色深淺與待測(cè)抗原（或抗體）的含量成正比。這種有色產(chǎn)物可用肉眼、光學(xué)顯微鏡、電子顯微鏡觀察，也可以用分光光度計(jì)（酶標(biāo)儀）加以測(cè)定。由于ELISA是基于抗原抗體反應(yīng)的特異性，這意味著該種方法的測(cè)定對(duì)象既可為抗原也可為抗體：當(dāng)被分析樣本為抗原時(shí)，檢測(cè)試劑可針對(duì)該種抗原產(chǎn)生特異性的抗體；當(dāng)被分析樣本為抗體時(shí)，則其目標(biāo)抗原可用作結(jié)合的試劑。
酶聯(lián)免疫分析試劑盒具體的操作流程：
1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2. 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；
3. 樣本孔中加入待測(cè)樣本50μL；空白孔不加。
4. 除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。
6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。
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